ATCC原代細(xì)胞的制備流程主要包括組織塊培養(yǎng)法和分離細(xì)胞培養(yǎng)法。以下是這兩種方法的具體步驟：
1.組織塊培養(yǎng)法
準(zhǔn)備組織材料：將取得的組織材料用培養(yǎng)液濕潤，并使用鋒利的眼科剪去除脂肪和結(jié)締組織，然后用平衡液（PBS或Hanks液）漂洗多次，直至液體清亮。
剪切組織塊：使用眼科彎剪將組織塊剪成小塊，并用PBS或Hanks液再次漂洗。
放置組織塊：用吸管吸取切碎的組織塊，輕輕吹到培養(yǎng)瓶皿中，均勻分布，注意不要使組織塊與培養(yǎng)液接觸。
培養(yǎng)組織塊：將培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn)，使瓶底朝上，在種植了組織塊一側(cè)的對側(cè)面加足培養(yǎng)液，塞緊瓶塞后靜置于37℃培養(yǎng)箱中。
更換培養(yǎng)液：每隔2到3天更換一次培養(yǎng)液，或者根據(jù)培養(yǎng)瓶種顏色的變化確定換液時間。
2.分離細(xì)胞培養(yǎng)法
消化組織：首先用細(xì)胞分散法收獲細(xì)胞，隨時吸取少量消化液在鏡下觀察，并根據(jù)組織是否分散成細(xì)胞團(tuán)或單個細(xì)胞，采取終止消化措施。
制備細(xì)胞懸液：低速離心細(xì)胞懸液，棄掉上清液，加入含血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打制成細(xì)胞懸液，計數(shù)并用培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞密度。
接種細(xì)胞：根據(jù)培養(yǎng)的細(xì)胞類型和實驗要求，用吸管吸取一定量的細(xì)胞懸液，加到培養(yǎng)瓶中，對于需要特殊底物的細(xì)胞，要先將底物涂一層于培養(yǎng)瓶皿底壁，然后接種細(xì)胞。
培養(yǎng)細(xì)胞：將培養(yǎng)瓶放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)，每隔2到3天更換培養(yǎng)液一次或根據(jù)培養(yǎng)液顏色的變化確定換液時間。
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