當前位置:網站首頁技術文章 > 人ELISA試劑盒如何實現蛋白、抗體的超靈敏定量?

      人ELISA試劑盒如何實現蛋白、抗體的超靈敏定量?

      更新時間:2025-07-08 點擊量:86
        人ELISA試劑盒通過優化試劑、信號放大和檢測技術,實現蛋白或抗體的超靈敏定量(通常達pg/mL至ng/mL級別)。
        一、人ELISA試劑盒通超靈敏度的核心機制:
        1. 高親和力抗體對
        捕獲抗體與檢測抗體的優化:
        選擇針對目標蛋白不同表位的高特異性單克隆抗體(如重組單抗或親和層析純化的抗體),減少非特異性結合。
        通過抗體配對篩選(如棋盤滴定法),確保捕獲抗體與檢測抗體的組合信號輸出。
        抗體濃度與包被條件:
        優化捕獲抗體的包被濃度和時間,確保抗原結合位點充足。
        使用高吸附能力的載體,提升抗原捕獲效率。
        2. 酶催化信號放大
        辣根過氧化物酶(HRP)底物系統:
        采用高靈敏度底物(如TMB、ABTS),HRP催化反應產生有色產物(如TMB氧化后顯藍色),可檢測低至10^-18 mol的酶活性。
        通過延長顯色時間(如30分鐘)或提高反應溫度(如37℃),增強信號強度。
        化學發光(ECL)或電化學發光(ECL):
        使用魯米諾類底物,在HRP催化下發出光子,通過化學發光儀檢測,靈敏度可達10^-20~10^-24 mol。
        電化學發光(如聯吡啶釕標記)通過電極激發,背景噪音更低,適合超微量檢測。
        3. 信號擴增技術
        生物*-鏈霉親和素系統(BA系統):
        檢測抗體標記生物*,通過鏈霉親和素-HRP復合物間接結合,實現信號級聯放大(如每一步結合可放大2~10倍信號)。
        納米材料應用:
        使用磁性納米顆粒(如Fe3O4)作為固相載體,增加抗原吸附面積。
        金納米顆粒或量子點標記抗體,通過多信號輸出(如熒光+比色)提升靈敏度。
        4. 樣本處理與濃縮
        血清/血漿預處理:
        通過離心、過濾或免疫沉淀(IP)去除高豐度蛋白,降低基質干擾。
        使用蛋白A/G磁珠去除樣本中的非目標抗體,避免競爭性抑制。
        超濾濃縮:
        對低濃度樣本(如細胞培養上清)進行超濾離心,濃縮目標蛋白10~100倍。
        二、人ELISA試劑盒通實驗操作優化:
        1. 標準曲線設計
        梯度稀釋:設置至少6個濃度梯度,涵蓋預期樣本濃度范圍。
        低濃度擴展:在極低濃度區增加多點,擬合非線性曲線。
        2. 孵育條件優化
        延長抗原-抗體反應時間:捕獲抗體與抗原的孵育時間從1小時延長至2~3小時,確保低濃度抗原充分結合。
        封閉液選擇:使用含BSA、酪蛋白或Tween-20的封閉液,封閉板內非特異性結合位點,降低背景噪音。
        3. 信號讀取與數據分析
        酶標儀參數設置:
        比色法:選擇雙波長檢測。
        化學發光:積分時間設為1~10秒,避免信號飽和。
        數據擬合:
        使用四參數邏輯擬合(4PL)替代線性回歸,準確計算低濃度樣本值。
        設置閾值,排除背景干擾。
       

       

      主站蜘蛛池模板: 镇宁| 泰顺县| 大英县| 耿马| 东方市| 武川县| 抚松县| 区。| 辽中县| 开封市| 瓦房店市| 西充县| 同德县| 博乐市| 深水埗区| 准格尔旗| 靖江市| 分宜县| 宁海县| 建宁县| 永州市| 芜湖县| 金华市| 涟水县| 来安县| 南和县| 荥经县| 鹤壁市| 清苑县| 绵竹市| 商都县| 康马县| 绥化市| 遵义市| 涿鹿县| 肥西县| 长垣县| 韶关市| 会东县| 太白县| 潞城市|